Dithiothreitol (DTT) jẹ́ ohun èlò ìdínkù tí a sábà máa ń lò, tí a tún mọ̀ sí àfikún ewé tuntun. Ó jẹ́ àdàpọ̀ kékeré onímọ́lẹ́kì pẹ̀lú àwọn ẹgbẹ́ mercaptan méjì (-SH). Nítorí ìdínkù àti ìdúróṣinṣin rẹ̀, a ń lo DTT dáadáa nínú àwọn ìwádìí biochemistry àti molecular biology.
Iṣẹ́ pàtàkì ti DTT ni láti dín àwọn ìdè disulfide kù nínú àwọn protein àti àwọn biomolecule mìíràn. Ìdè disulfide jẹ́ apá pàtàkì nínú ìdìpọ̀ protein àti ìdúróṣinṣin, ṣùgbọ́n lábẹ́ àwọn ipò ìdánwò kan, bíi ìṣàyẹ̀wò SDS-PAGE tí a lè dínkù, ìdàpọ̀ protein àti ìdìpọ̀, ó ṣe pàtàkì láti dín ìdè disulfide kù sí àwọn ẹgbẹ́ thiol méjì láti tú ìṣètò àlàfo ti protein náà. DTT le ṣe àtúnṣe pẹ̀lú àwọn ìdè disulfide láti dín wọn kù sí àwọn ẹgbẹ́ mercaptan, nípa bẹ́ẹ̀ ó ṣí ìṣètò àlàfo ti protein náà sílẹ̀ ó sì jẹ́ kí ó rọrùn láti ṣàyẹ̀wò àti ṣe àtúnṣe.
A tun le lo DTT lati daabobo iṣẹ-ṣiṣe ati iduroṣinṣin enzyme. Ninu awọn iṣe-ṣiṣe ti a ṣe catalyzed enzyme kan, iṣẹ-ṣiṣe enzyme naa le dinku nipasẹ oxidant. DTT le ṣe atunṣe pẹlu awọn oxidants lati dinku wọn si awọn nkan ti ko ni ipalara, nitorinaa daabobo iṣẹ-ṣiṣe ati iduroṣinṣin ti enzyme naa.
Ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ohun èlò ìdínkù àṣà ìbílẹ̀ bíi β-mercaptoethanol (β-ME), a kà DTT sí ohun èlò ìdínkù tí ó ní ààbò àti tí ó dúró ṣinṣin. Kì í ṣe pé ó dúró ṣinṣin nínú omi nìkan ni, ó tún ń pa àwọn ohun èlò ìdínkù rẹ̀ mọ́ lábẹ́ igbóná gíga àti ipò acid-base.
Lilo DTT rọrun diẹ. Ni gbogbogbo, a maa n yo DTT kuro ninu apo ti o yẹ lẹhinna a fi kun eto idanwo naa. A nilo lati pinnu ifọkansi DTT ti o dara julọ gẹgẹbi idanwo pato, a si maa n lo o ni iwọn 0.1-1mM. Awọn ifọkansi ti o kere si le dinku awọn ipa odi lori idagbasoke sẹẹli ati pe o le dinku majele nitori ifihan pupọ ti awọn ọlọjẹ afojusun. Awọn ifọkansi ti o ga julọ le fa ẹru iṣelọpọ sẹẹli ti o pọ si, ti o ni ipa lori idagbasoke sẹẹli ati ṣiṣe ikosile.
Ọ̀nà láti mọ ìṣọ̀kan tó dára jùlọ ni láti ṣe àyẹ̀wò ìpele ìṣọ̀kan ti amuaradagba àfojúsùn nípa ṣíṣe àwọn ìdánwò ìfàmọ́ra IPTG ní onírúurú ìṣọ̀kan. A lè ṣe àwọn ìdánwò àṣà kékeré nípa lílo onírúurú ìṣọ̀kan IPTG (fún àpẹẹrẹ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, àti bẹ́ẹ̀ bẹ́ẹ̀ lọ) àti pé a lè ṣe àyẹ̀wò ìṣọ̀kan ní onírúurú ìṣọ̀kan nípa wíwá ìpele ìṣọ̀kan ti amuaradagba àfojúsùn (fún àpẹẹrẹ Western blot tàbí ìwádìí fluorescence). Gẹ́gẹ́ bí àwọn àbájáde ìdánwò, a yan ìṣọ̀kan pẹ̀lú ipa ìṣọ̀kan tó dára jùlọ gẹ́gẹ́ bí ìṣọ̀kan tó dára jùlọ.
Ni afikun, o tun le tọka si awọn iwe ti o yẹ tabi iriri awọn ile-iṣẹ yàrá miiran lati loye ibiti o ti n lo IPTG ti a lo nigbagbogbo labẹ awọn ipo idanwo kanna, lẹhinna mu dara julọ ati ṣatunṣe ni ibamu si awọn iwulo idanwo naa.
Ó ṣe pàtàkì láti kíyèsí pé ìfojúsùn tó dára jùlọ lè yàtọ̀ síra ní ìbámu pẹ̀lú onírúurú ètò ìgbékalẹ̀, àwọn èròjà tí a fojú sí, àti àwọn ipò ìdánwò, nítorí náà ó dára láti ṣe àtúnṣe ní ìbámu pẹ̀lú irú ọ̀ràn kan-náà.
Ní ṣókí, DTT jẹ́ ohun èlò ìdínkù tí a sábà máa ń lò tí a lè lò láti dín ìdè disulfide nínú àwọn protein àti àwọn biomolecules mìíràn kù àti láti dáàbò bo ìṣiṣẹ́ àti ìdúróṣinṣin enzyme. A ti lò ó dáadáa nínú àwọn ìwádìí biochemistry àti molecular biology.
Àkókò ìfìwéránṣẹ́: Oṣù Kẹsàn-28-2023