Dithiothreitol (DTT) jẹ aṣoju idinku ti o wọpọ ti a lo, ti a tun mọ ni aropọ alawọ ewe tuntun.O ti wa ni kekere kan molikula Organic yellow pẹlu meji mercaptan awọn ẹgbẹ (-SH).Nitori awọn ohun-ini idinku ati iduroṣinṣin rẹ, DTT ni lilo pupọ ni biokemika ati awọn adanwo isedale molikula.
Iṣe akọkọ ti DTT ni lati dinku awọn ifunmọ disulfide ninu awọn ọlọjẹ ati awọn ohun elo biomolecules miiran.Isopọ disulfide jẹ apakan pataki ti kika amuaradagba ati iduroṣinṣin, ṣugbọn labẹ awọn ipo idanwo kan, gẹgẹ bi itupalẹ SDS-PAGE ti o dinku, isọdọtun amuaradagba ati kika, o jẹ dandan lati dinku iwe adehun disulfide si awọn ẹgbẹ thiol meji lati ṣii eto aye ti aaye. amuaradagba.DTT le fesi pẹlu awọn ifunmọ disulfide lati dinku wọn si awọn ẹgbẹ mercaptan, nitorinaa ṣiṣi eto aye ti amuaradagba ati jẹ ki o rọrun lati ṣe itupalẹ ati riboribo.
DTT tun le ṣee lo lati daabobo iṣẹ ṣiṣe enzymu ati iduroṣinṣin.Ni diẹ ninu awọn aati-catalyzed enzymu, iṣẹ ṣiṣe ti henensiamu le dinku nipasẹ oxidant.DTT le ṣe pẹlu awọn oxidants lati dinku wọn si awọn nkan ti ko lewu, nitorinaa aabo iṣẹ ṣiṣe ati iduroṣinṣin ti henensiamu.
Ti a ṣe afiwe si awọn aṣoju idinku ibile gẹgẹbi β-mercaptoethanol (β-ME), DTT ni a gba pe o jẹ ailewu ati aṣoju idinku iduroṣinṣin diẹ sii.Kii ṣe iduroṣinṣin nikan ni ojutu olomi, ṣugbọn tun ṣetọju awọn ohun-ini idinku rẹ labẹ iwọn otutu giga ati awọn ipo ipilẹ-acid.
Awọn lilo ti DTT jẹ jo o rọrun.Ni gbogbogbo, DTT ti wa ni tituka ni ifipamọ ti o yẹ ati lẹhinna ṣafikun si eto idanwo naa.Idojukọ ti o dara julọ ti DTT nilo lati pinnu ni ibamu si idanwo kan pato, ati pe a lo ni gbogbogbo ni iwọn 0.1-1mM.Awọn ifọkansi kekere le dinku awọn ipa buburu lori idagbasoke sẹẹli ati pe o le dinku cytotoxicity nitori iwọn apọju ti awọn ọlọjẹ afojusun.Awọn ifọkansi ti o ga julọ le fa ẹru iṣelọpọ sẹẹli ti o pọ ju, ti o ni ipa lori idagbasoke sẹẹli ati ṣiṣe ikosile.
Ọna lati pinnu ifọkansi ti o dara julọ le jẹ lati ṣe iṣiro ipele ikosile ti amuaradagba ibi-afẹde nipa ṣiṣe awọn idanwo ifilọlẹ IPTG ni awọn ifọkansi oriṣiriṣi.Awọn idanwo aṣa-kekere le ṣee ṣe ni lilo iwọn awọn ifọkansi IPTG (fun apẹẹrẹ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ati bẹbẹ lọ) ati ipa ikosile ni awọn ifọkansi oriṣiriṣi le ṣe iṣiro nipasẹ wiwa ipele ikosile ti amuaradagba afojusun (fun apẹẹrẹ Oorun abawọn tabi iwari fluorescence).Gẹgẹbi awọn abajade esiperimenta, ifọkansi pẹlu ipa ikosile ti o dara julọ ni a yan bi ifọkansi ti o dara julọ.
Ni afikun, o tun le tọka si awọn iwe ti o yẹ tabi iriri ti awọn ile-iṣẹ miiran lati loye ibiti ifọkansi IPTG ti a lo nigbagbogbo labẹ awọn ipo idanwo kanna, ati lẹhinna mu ki o ṣatunṣe ni ibamu si awọn iwulo esiperimenta.
O ṣe pataki lati ṣe akiyesi pe ifọkansi ti o dara julọ le yatọ si da lori awọn ọna ṣiṣe ikosile ti o yatọ, awọn ọlọjẹ ibi-afẹde, ati awọn ipo idanwo, nitorinaa o dara julọ lati mu dara si lori ipilẹ-ọrọ.
Ni akojọpọ, DTT jẹ aṣoju idinku ti o wọpọ ti o le ṣee lo lati dinku awọn ifunmọ disulfide ninu awọn ọlọjẹ ati awọn ohun elo biomolecules miiran ati lati daabobo iṣẹ ṣiṣe enzymu ati iduroṣinṣin.O ti wa ni lilo pupọ ni biochemistry ati awọn adanwo isedale molikula.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-28-2023