Bawo ni lati pinnu ifọkansi ti o dara julọ?
Fun inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), ifọkansi ti o ga julọ, dara julọ.Idojukọ ti o dara julọ da lori awọn ipo idanwo kan pato ati ipa ifakalẹ ti o fẹ.
Ni gbogbogbo, ifọkansi ti IPTG ni a lo ni iwọn 0.1-1 mM.Awọn ifọkansi kekere le dinku awọn ipa buburu lori idagbasoke sẹẹli ati pe o le dinku cytotoxicity nitori iwọn apọju ti awọn ọlọjẹ afojusun.Awọn ifọkansi ti o ga julọ le fa ẹru iṣelọpọ sẹẹli ti o pọ ju, ti o ni ipa lori idagbasoke sẹẹli ati ṣiṣe ikosile.
Ọna lati pinnu ifọkansi ti o dara julọ le jẹ lati ṣe iṣiro ipele ikosile ti amuaradagba ibi-afẹde nipa ṣiṣe awọn idanwo ifilọlẹ IPTG ni awọn ifọkansi oriṣiriṣi.Awọn idanwo aṣa-kekere le ṣee ṣe ni lilo iwọn awọn ifọkansi IPTG (fun apẹẹrẹ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ati bẹbẹ lọ) ati ipa ikosile ni awọn ifọkansi oriṣiriṣi le ṣe iṣiro nipasẹ wiwa ipele ikosile ti amuaradagba afojusun (fun apẹẹrẹ Oorun abawọn tabi iwari fluorescence).Gẹgẹbi awọn abajade esiperimenta, ifọkansi pẹlu ipa ikosile ti o dara julọ ni a yan bi ifọkansi ti o dara julọ.
Ni afikun, o tun le tọka si awọn iwe ti o yẹ tabi iriri ti awọn ile-iṣẹ miiran lati loye ibiti ifọkansi IPTG ti a lo nigbagbogbo labẹ awọn ipo idanwo kanna, ati lẹhinna mu ki o ṣatunṣe ni ibamu si awọn iwulo esiperimenta.
O ṣe pataki lati ṣe akiyesi pe ifọkansi ti o dara julọ le yatọ si da lori awọn ọna ṣiṣe ikosile ti o yatọ, awọn ọlọjẹ ibi-afẹde, ati awọn ipo idanwo, nitorinaa o dara julọ lati mu dara si lori ipilẹ-ọrọ.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹsan-28-2023